Hitung Eritrosit Manual: Panduan Lengkap & Tepat

Menghitung jumlah eritrosit, atau sel darah merah, adalah prosedur laboratorium krusial dalam diagnosis dan pemantauan berbagai kondisi medis. Meskipun teknologi otomatis telah banyak menggantikan metode manual, pemahaman dan kemampuan untuk melakukan hitung eritrosit manual tetap relevan, terutama di fasilitas dengan sumber daya terbatas atau sebagai metode konfirmasi. Artikel ini akan mengupas tuntas cara melakukan hitung eritrosit manual dengan tepat dan efisien.

Apa itu Eritrosit?

Eritrosit adalah komponen seluler darah yang paling melimpah, bertanggung jawab untuk mengangkut oksigen dari paru-paru ke seluruh jaringan tubuh dan mengangkut kembali karbon dioksida dari jaringan ke paru-paru. Jumlah eritrosit yang normal dalam darah menunjukkan kesehatan umum seseorang. Kelainan pada jumlah eritrosit dapat mengindikasikan penyakit seperti anemia (jumlah eritrosit rendah) atau polisitemia (jumlah eritrosit tinggi).

Mengapa Hitung Eritrosit Manual Masih Penting?

Meskipun alat hitung sel darah otomatis (hematology analyzer) menawarkan kecepatan dan presisi yang tinggi, metode manual masih memiliki beberapa keuntungan penting:

Aksesibilitas: Di daerah terpencil atau laboratorium dengan anggaran terbatas, alat otomatis mungkin tidak tersedia. Hitung manual menjadi satu-satunya pilihan.
Konfirmasi: Hasil dari alat otomatis terkadang memerlukan validasi manual, terutama jika ada keraguan atau jika sampel menunjukkan kelainan morfologi sel.
Pemahaman Mendalam: Melakukan perhitungan manual memberikan pemahaman yang lebih baik tentang prinsip dasar penghitungan sel dan faktor-faktor yang memengaruhinya.
Penilaian Morfologi: Saat menghitung secara manual, teknisi laboratorium juga dapat mengamati morfologi (bentuk dan ukuran) sel darah merah, yang bisa menjadi petunjuk diagnostik penting.

Alat dan Bahan yang Dibutuhkan

Untuk melakukan hitung eritrosit manual, Anda memerlukan beberapa alat khusus:

Pipet Ester/Pipet Mikro Hematologi: Pipet khusus yang dilengkapi dengan skala untuk mengencerkan darah dengan perbandingan tertentu (misalnya, 1:100 atau 1:200).
Larutan Pengencer (Diluent): Larutan isotonik yang mencegah sel darah merah pecah atau menggumpal. Larutan Hayem atau larutan fiksasi eritrosit lainnya umum digunakan.
Hemocytometer: Alat kaca berbentuk slide mikroskop khusus dengan area penghitungan yang terbagi menjadi kotak-kotak berukuran tertentu. Bagian tengah hemocytometer memiliki grid yang dibagi lagi menjadi 9 kotak besar, di mana 4 kotak di antaranya (kotak sudut) dan 1 kotak di tengah dibagi lagi menjadi kotak-kotak kecil.
Cover Glass (Penutup Kaca): Kaca penutup khusus yang dirancang untuk hemocytometer agar menghasilkan kedalaman ruang hitung yang tepat.
Mikroskop: Mikroskop cahaya dengan pembesaran 10x (objektif) dan 40x (objektif) atau 100x (oil immersion) untuk melihat sel dengan jelas.
Lancet, Kapas Alkohol, Kasa: Untuk pengambilan sampel darah kapiler.
Tabung Reaksi Kecil atau Eppendorf Tube: Untuk proses pengenceran.

Langkah-Langkah Melakukan Hitung Eritrosit Manual

Proses hitung eritrosit manual dapat dibagi menjadi beberapa tahapan penting:

1. Persiapan Sampel Darah

Ambil sampel darah kapiler (dari ujung jari) atau darah vena yang telah diantikoagulasi. Pastikan darah mengalir lancar dan tidak banyak mengandung gelembung udara.

2. Pengenceran Darah

Ini adalah langkah krusial.

Isap darah ke dalam pipet ester hingga tanda yang sesuai (misalnya, tanda 0.5 atau 1).
Bersihkan ujung pipet dengan kasa.
Isap larutan pengencer ke dalam pipet hingga tanda pengenceran yang diinginkan (misalnya, tanda 11, sehingga total pengenceran menjadi 1:20 atau tanda 21, sehingga pengenceran 1:40 jika dimulai dari tanda 0.5). Perbandingan umum adalah 1:100 atau 1:200 untuk eritrosit. Mari kita gunakan contoh pengenceran 1:100 (0.5 darah + 10 larutan pengencer).
Campurkan darah dan larutan pengencer dengan baik dengan memutar pipet atau menggunakan alat pencampur. Buang tetesan pertama dari ujung pipet karena konsentrasinya belum homogen.

Faktor pengenceran (Dilution Factor/DF) sangat penting dan harus dicatat. Untuk 1:100, DF = 100.

3. Memuat Hemocytometer

Pastikan hemocytometer dan cover glass bersih. Letakkan cover glass di atas area penghitungan hemocytometer.
Pegang pipet yang berisi campuran darah secara horizontal. Teteskan suspensi darah yang telah diencerkan ke tepi cover glass di bawahnya. Cairan akan terserap masuk ke dalam ruang hitung karena aksi kapilaritas. Hindari gelembung udara. Anda akan mengisi 4 area kotak besar (masing-masing 1 mm²) yang dibagi menjadi 16 kotak kecil.

4. Penghitungan Sel

Tempatkan hemocytometer pada meja mikroskop. Gunakan lensa objektif 40x atau 100x. Fokuskan mikroskop untuk melihat sel-sel eritrosit dengan jelas.
Hitung jumlah eritrosit di dalam 4 kotak besar sudut (masing-masing 1 mm²) pada hemocytometer. Ada aturan khusus untuk menghitung sel yang berada tepat di garis batas:

Jika sel berada di garis batas atas atau garis batas kanan, hitung sel tersebut.
Jika sel berada di garis batas bawah atau garis batas kiri, jangan hitung sel tersebut.

Ini dilakukan untuk menghindari penghitungan ganda dan konsisten di seluruh area yang dihitung.

5. Perhitungan Jumlah Eritrosit Total

Jumlahkan total eritrosit yang terhitung dari keempat kotak besar sudut.
Jumlah sel per mm³ = (Total jumlah eritrosit yang dihitung) / (Luas total area yang dihitung dalam mm²)
Kedalaman ruang hitung hemocytometer adalah 0.1 mm. Luas 4 kotak besar adalah 4 x (1 mm x 1 mm) = 4 mm².
Volume 4 kotak besar = Luas x Kedalaman = 4 mm² x 0.1 mm = 0.4 mm³.
Jumlah eritrosit per mm³ (atau mikroliter/µL) = (Total jumlah eritrosit yang dihitung) / (Volume total area yang dihitung dalam mm³)
Jumlah eritrosit per µL = (Total jumlah eritrosit yang dihitung) / 0.4
Untuk mendapatkan jumlah eritrosit dalam darah asli (sebelum diencerkan), gunakan rumus:
Jumlah Eritrosit/µL = (Rata-rata jumlah eritrosit per kotak) x Faktor Pengenceran (DF) x 10.000
(Angka 10.000 berasal dari 1 / (Volume 1 kotak kecil x kedalaman), di mana volume 1 kotak besar adalah 0.4 mm³ sehingga 1 kotak besar adalah 0.4 µL. Jika kita menghitung di 4 kotak besar, volumenya 1.6 µL. Jika kita menghitung di 1 kotak sedang (1 mm²) yang dibagi 16 kotak kecil, volume 1 kotak sedang adalah 0.1 µL. Namun, pada hemocytometer standar, kita biasanya menghitung di 4 kotak sudut yang masing-masing berukuran 1 mm², sehingga total luas 4 mm². Dengan kedalaman 0.1 mm, volume total adalah 0.4 mm³ atau 0.4 µL. Maka perhitungannya adalah: (Total eritrosit terhitung / 0.4) x DF. Untuk menyederhanakan perhitungan, faktor 10.000 sering digunakan, yang didapat dari 1 / (0.1 mm kedalaman x 1 mm² luas 1 kotak besar) x 10 (untuk total 10 kotak sedang yang diteliti, atau 4 kotak sudut yang masing-masing berisi 16 kotak kecil). Rumus yang paling umum dan mudah diingat adalah: Jumlah Eritrosit (sel/µL) = (Jumlah total sel dalam 4 kotak) x DF x 10.000 jika mengacu pada hitungan di 4 kotak sudut yang total luasnya 4 mm².)

Nilai Normal dan Interpretasi

Jumlah eritrosit normal bervariasi antara pria dan wanita, serta usia. Secara umum:

Pria dewasa: 4.7 - 6.1 juta sel/µL
Wanita dewasa: 4.2 - 5.4 juta sel/µL

Jumlah eritrosit yang lebih rendah dari normal dapat mengindikasikan anemia, sementara jumlah yang lebih tinggi bisa menandakan polisitemia atau dehidrasi. Selalu interpretasikan hasil bersama dengan gambaran klinis pasien dan hasil pemeriksaan laboratorium lainnya.

Tips Penting

Kebersihan: Pastikan semua alat bersih untuk menghindari kontaminasi.
Akurasi Pengenceran: Pengenceran yang tidak tepat akan sangat memengaruhi hasil akhir.
Perhitungan yang Cermat: Teliti saat menghitung sel, gunakan aturan garis batas dengan benar.
Homogenitas Sampel: Pastikan sampel darah tercampur rata dengan larutan pengencer.
Hindari Gelembung Udara: Gelembung udara dapat disalahartikan sebagai sel.

Dengan pemahaman yang baik dan latihan yang cukup, hitung eritrosit manual dapat menjadi metode yang andal dan informatif dalam evaluasi kesehatan darah.